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研制三价疫苗以预防 迈阿密人 和 海蒂米丝肌 在养殖橄榄比目鱼
摘要：寄生性病原体引起的球虫病 迈阿密人 ,对韩国的橄榄比目鱼养殖场构成重大威胁。受感染的鱼受到严重的系统性感染,影响到各种器官,并有潜在的继发性细菌疾病。这项研究调查了 M.个人的 2015年至2020年,韩国济州岛20个橄榄比目鱼养殖场的血清类型。另外,我们发现 海蒂米丝肌 作为共同感染的细菌。根据血清分类和监测数据,我们针对两种血清类型研制了三价疫苗。 M.个人的 其中一种是 T. maritimum .在实验室条件下对疫苗的有效性进行了评估,结果表明,疫苗的相对存活率为75%、80%和93%。 M.个人的 一型血清, M.个人的 血清型II和 T. maritimum 分别。此外,在四个不同的橄榄比目鱼养殖场进行的成功田间试验,使接种疫苗的鱼的存活率(52%-76%RPS)和体重增加显著提高。总的来说,这项研究提出了一种有效的疫苗 M.个人的 和 T. maritimum 养殖橄榄比目鱼感染,对韩国的可持续水产养殖作出了宝贵贡献。
关键词: 橄榄球虫病; 迈阿密人 ; 海蒂米丝肌 ;疫苗
导言
球虫病是世界范围内影响长尾鱼养殖的一种流行的寄生虫病。它是由各种纤毛物种引起的,包括 黑人乌罗内马 , 他说:"我是说, 和 迈阿密人 .在这些物种中, M.个人的 是导致橄榄比目鱼球虫病的主要病原体( 近生的橄榄球 ) aquaculture ( 康金,2014年 ; 宋等人。2009年a )。橄榄比目鱼感染 M.个人的 严重的全身感染,导致皮肤至大脑的器官特异性病理改变( 金姆等人。,2019 ). Moreover, M.个人的 感染也增加了继发性细菌疾病的风险,如张力杆菌病和弧菌病( 荣格等人。,2007年 )。目前的控制措施包括抗生素和福尔马林治疗,尽管它们的疗效仅限于轻微感染( 伊格莱西亚斯等人。,2002年 ; 日本犹太人协会,2002年 )。此外,政府出于对食品安全和环境影响的关注,严格管制其使用。因此,用有效的疫苗接种鱼类 M.个人的 感染是在不损害公共健康的情况下成功预防球虫病的关键。研究人员已研制出实验性疫苗,在实验室条件下显示出有前途的预防性效果( 拉玛斯等人。2008年 ; 里昂-罗德里格斯等人。2012年 )。然而,缺乏关于这些疫苗的有效性和安全性的综合实地数据。
在这项研究中,我们进行了一项为期5年的调查 M.个人的 共同感染的细菌, 海洋张力杆菌, 在韩国济州岛的20个橄榄比目鱼农场。通过全面疾病监测,包括 M.个人的 血清分类和分析 T. maritimum 共同感染,我们研制了一种含有两种不同血清型的三价疫苗。 M.个人的 其中一种是 T. maritimum预防养殖橄榄比目鱼相应疾病的发生。通过实验室条件下的实验感染来评估疫苗的效力,并通过在不同的养鱼场进行的实地试验来进一步验证疫苗的效力。
材料和方法
监测 迈阿密人 感染和合并感染 海蒂米丝肌
在韩国济州岛( Fig. 1A )。每个月从每个农场随机收集五条鱼。在2015年2月n至2020年3月n期间,共获得了6,200个橄榄比目鱼样本。采集的鱼用光镜检查,以确定是否感染了 M.个人的 当时在场。
fas-26-10-605-g1Fig. 1. 发生 迈阿密人 疾病爆发和 海蒂米丝肌 济州岛橄榄比目鱼养殖场的共同感染。 答:济州岛20个橄榄比目鱼养殖场,实施了强化疾病监测方案。B: 迈阿密人 一级和一级血清型 M.个人的 从2015年2月n至2020年3月n确定的第二型血清。C:百分比 M.个人的 感染和 海蒂米丝肌 从2015年2月n至2020年3月n共同感染。下载原图
T. maritimum 从橄榄比目鱼的肝脏、肾脏和脾脏中分离出来,并在Difco上孵化。 万吨 海洋琼脂板(美国,新泽西州,富兰克林湖)。采用聚合酶链反应(PCR)与物种特异性引物(正体:5'-AATGttcttaaa-3',反体:5'-CGctctctgttgcaga-3')显微和分子分析证实48株分离菌株; 阿文达尼奥-埃雷拉等人。2004年 ).
血清分类 迈阿密人 使用 考克斯 1个基因序列分析
M.个人的 从感染的鱼中分离出来的菌丝是通过给寄生虫喂食黑鱼(FHM)细胞培养的。基因组DNA提取利用迪纳希血液和组织试剂盒(德国希尔登,奇根)。利用PCR技术对线粒体细胞色素C氧化酶亚基1( 考克斯 1)基因 M.个人的 使用特定的底漆 (COX) 1 forward: 5′-GGTTCTAAAGATGTGGCTTACCCTAGAC-3′, 考克斯 1反向:5'-------------------)。扩增的PCR片段被纯化,克隆到pmd20-t向量中,并进行测序(大根,韩国,首尔)。获得的 考克斯 1核苷酸序列 M.个人的 与以往研究中所报告的使用集群塔( http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/ )。利用邻居连接法构建了系统发育树。 考克斯 一个序列。复制的百分比为1,000次复制。
孤立体的毒性评价 迈阿密人 和 海蒂米丝肌 限制
在韩国济州岛当地的一个农场购买了平均体重为8克的健康橄榄球。在实验开始前的一个星期,这些鱼被首次诊断为没有病原体感染,并在20℃的条件下适应实验条件。… M.个人的 用FHM培养寄生虫,在莱波维奇的L-15(L-15)培养基中种植,其中含有100U/毫升的盘尼西林和100G/毫升链霉素,并在20℃时补充10%的胎儿牛血清。 迪科瓦等人(2010年) .收获的 M.个人的 经室温500×克离心15分钟,再悬浮细胞在光镜下用血细胞计计数。… T. maritimum 在海洋肉汤培养基中培养细菌的时间为25℃,24小时。将培养的细菌在4,000×克的浓度下离心30分钟,再悬浮在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。… T. maritimum 利用600纳米波长的光密度测量和1OD=2×10方程测定细胞数。 8 中央情报局。
一组20只鱼在腹腔注射100个不同浓度的细胞(1×10) 4 , 1 × 10 5 , and 1 × 10 6 细胞/鱼类) M.个人的 分别为JJB1403和JJC1404菌株。同样, T. maritimum 将Kor-JJ菌株注入鱼类体内,浓度为1x10 7 , 1 × 10 8 and 1 × 10 9化学品/鱼类。用同样量的L-15培养基或PBS溶液注射的鱼作为负对照。将被注射的鱼放在装有50升曝气海水的70升的水箱中,用紫外线处理,并通过1微米的墨盒过滤器过滤。每日两次换水,每天记录死亡21天。大韩民国济州国立大学动物护理和使用机构委员会对动物实验进行了道德审核(核准号:第。(2018-0005)。
三价疫苗制剂
我们利用来自 M.个人的 JJB1403, JJB1404, and T. maritimum 用福尔马林灭活的Kor-JJ菌株。 M.个人的 和 T. maritimum 采用上述毒性评价实验方法进行培养。福尔马林固定术 M.个人的 在25℃条件下,用0.3%的福尔马林连续搅拌,持续搅拌1h,并 T. maritimum 使用1%福尔马林治疗,4℃72小时。在PBS中,由25%角化烯(西格玛,S3626)、2.5%之间80(西格玛,P833)和2.5%跨85(西格玛,S7135)组成的佐剂,在上一次研究中介绍了该助剂的制备方法( 卡拉布罗等人。2013年 )。最后, M.个人的 JJB 1403 (2.5 × 10 6 牢房/毫升), M.个人的 JJC 1404 (2.5 × 10 6 牢房/毫升), T. maritimum KOR-JJ (2 × 10 9用高剪切搅拌机对CFU/ML菌株和10%佐剂进行了30分钟内8,000转的均质处理。
在实验室条件下接种鱼类疫苗及随后的实验感染
韩国济州岛当地的橄榄比目鱼养殖场购买了平均体重为15克的健康橄榄比目鱼。在三个2000升的海水流量池(n=150条鱼/三组)中养殖鱼类,在18℃时,每天进行1000%的水交换和持续通风。经一周的适应后,每组鱼分别注射100升三价疫苗、佐剂和PBS。在接种后4周,每个实验组(n=20个鱼缸)注射5×10 5 细胞/鱼类 M.个人的 (JJB1403, JJC1404) and 8 × 10 7 渔业部/渔业部 T. maritimum .死亡记录21天,并根据以下公式评价疫苗的疗效。
相对存活率(RPS)=1 − [(注射疫苗组死亡率/对照组死亡率)] × 100 .
酶联免疫吸附法抗体滴定法
实验组中有10条鱼在0,2,4,6,8周后接种。从每个实验组的橄榄尾静脉采集血液。血液样本在室温下保存1小时,在4℃下储存一夜,然后在3,000×克的温度下在4℃下离心10分钟,以获得血清。血清样本在使用前保存在-20℃。
每口96井平板培养板涂布100安特升井 M.个人的 JJB1403 and JJC1404 (1 × 10 6 牢房/毫升)和 T. maritimum (1 × 10 9 加涂层缓冲器(30毫米纳) 2 公司 3 和70毫米纳赫科 3值9.0)。这些板块在摄氏4度时孵化时间为24小时。在使用含有0.1%-20吨(tbs-t;1%)的TBS缓冲盐水(tbs)清洗后,用200升的脱脂牛奶溶液(tbps-t和5%的脱脂牛奶)在4°C时堵塞1h。然后用TBS-T溶液冲洗平板,用血清对井进行处理(90只牛脱脂牛奶溶液和10只牛血清)。经过4℃2小时的潜伏期后,用三溴二苯醚----T溶液洗三次盘子,并在4℃下用100吨小鼠抗伊格姆姆(1:1500)在2小时内孵化。再用TBS-T溶液和100头角辣根过氧化物酶(1:1,500)增加了结合的山羊抗鼠二级抗体(韩国汉城的年轻人)。在4℃条件下孵化2小时后,用三溴二苯醚----T溶液将板洗三次。最后,3,3',5,5'-四甲基苯胺液体溶液。增加了美国密苏里州路易斯。反应以2小时停止 2 所以 4 ,并使用微板分光光度计测量了450纳米的吸收度(美国马州沃瑟姆市,热费舍尔科学)。
疫苗功效评估的实地试验
选择了四个标有A、B、C和D的橄榄比目鱼养殖场,以评价田间条件下疫苗的有效性。注射疫苗的鱼类数目载於 表1 .在接种疫苗前两天,鱼会被饿死。在斋戒期之后,在鱼类体内注射了0.1毫升三价疫苗,平均尺寸分别为42.5克、65.2克、55.3克和52.5克。每组的死亡率每天都有记录。收集死鱼,并通过显微镜检查鳃和皮肤的擦伤,以确定感染水平。 M.个人的 和 T. maritimum .此外,还从肝脏、肾脏和脾脏的涂片中分离出细菌菌株,并在25℃的海洋琼脂板上培养48小时。培养的细菌是用 T. maritimum 特定的PCR引物。大韩民国济州国立大学动物护理和使用机构委员会对动物实验进行了道德审核(核准号:第。)。
Table 1. 四个田间试验场实验鱼数、平均重量、死鱼数、累计死亡率和相对百分率生存值
养鱼场 疫苗组 控制组 生存率(%)
不。总鱼量 不。死鱼 累计死亡率(%) 初始平均重量(g) 最后平均重量(g) 不。总鱼量 不。死鱼 累计死亡率(%) 初始平均重量(g) 最后平均重量(g)
A 11,700 499 (6 1) ) 4.26 (0.05 1) ) 42.5 ± 4.5 217.5 ±15.0 12,500 2,256 (2,133 1) ) 18.04 (17.06 1) ) 45.2 ± 3.8 215.2 ± 13.5 76.38 (99.70 1) )
B 8,500 2,468 (2,468 1) ) 29.04 (29.04 1) ) 65.2 ± 4.5 241.0 ± 9.9 10,000 6,920 (6,920 1) ) 69.20 (69.20 1) ) 71.4 ± 11.4 232.8 ± 7.0 58.04 (58.04 1) )
C 11,800 359 (317 1) ) 3.04 (2.68 1) ) 55.3 ± 3.5 171.1 ± 12.5 12,000 1,347 (1,301 1) ) 11.22 (10.84 1) ) 56.2 ± 4.8 160.4 ± 11.5 72.91 (75.18 1) )
D 4,000 1,308 (1,262 1) ) 32.70 (31.55 1) ) 52.5 ± 3.1 152.2 ± 8.5 6,500 4,488 (4,361 1) ) 69.04 (67.09 1) ) 51.4 ± 4.5 130.2 ± 7.9 52.64 (52.98 1) )
1) 鱼类死亡率 迈阿密人 和/或 海蒂米丝肌 感染。
下载表格
结果
迈阿密人 和 海蒂米丝肌 橄榄比目鱼养殖场的感染
2015年至2020年期间,共计390人 M.个人的 已查明感染。血清分类分析显示有两种血清类型 M.个人的 (1型和II型血清),占已确定总数的83%和17% M.个人的 分别感染( Fig. 1B )。值得注意的是,在调查中,发现超过50%的 M.个人的 感染伴有 T. maritimum 共同感染。
血清分类 迈阿密人
结果分析显示 M.个人的 血清I型和II型在 考克斯 16个染色体的一个基因( Fig. 2 )。为了进行系统发育分析, 考克斯 1个基因来自 M.个人的 血清型一( M.个人的 JJB1403) and M.个人的 serotype II ( M.个人的 被比较为 考克斯 1在以往研究中报告的序列( 荣格等人。2011年 )。结果显示 M.个人的 JJB1403 was clustered together with 11 other strains (Nakajima, GJ01, WDS-0709, WDB-0708, SJF-06A, YS2, WD4, JJ4, JJ3, WS1, and SJF-03A) as serotype I, whereas M.个人的 JJC1404与另外七株菌株(SJF-03BB,YK1,YK2,JF05to,RF05to,Sk05Kyo和IYO1)聚集在一起,确认其分类为血清型II( Fig. 3 ).
fas-26-10-605-g2Fig. 2. 排列顺序 考克斯 两个血清型的一个基因 迈阿密人 .下载原图
fas-26-10-605-g3Fig. 3. 系统发育分析 迈阿密人 JJB1403,JJC1404及其他 M.个人的 血清型。 分支数表示了基于5,000个复制的引导值。下载原图
有害的 迈阿密人 和 海蒂米丝肌 限制
在毒性测试中, M.个人的 JJB1403和 M.个人的 JJC1404三种剂量均超过70%( Fig. 4A 和 4B ). For T. maritimum 注射浓度为1x10的鱼类 9 注射后5天内,细胞/鱼类的死亡率达到100%。浓度为1x10 8 细胞/鱼和1x10 7 细胞/鱼类,死亡原因 T. maritimum Kor-JJ分别达到55%和30%( 无花果。4C)。这些结果共同表明,采集的病原菌对橄榄比目鱼具有毒性和致病性,因此适合疫苗研制。
fas-26-10-605-g4Fig. 4. 橄榄比目鱼群的累积死亡率 迈阿密人 JJB14031e+4细胞/鱼至1e+6细胞/鱼,(b) M.个人的 JJC14041e+4细胞/鱼至1e+6细胞/鱼,和(c) 海蒂米丝肌 1e+7CFU/鱼至1e+9CFU/鱼的范围。 腹腔注射,腹腔注射。下载原图
疫苗在实验室的功效
受感染的对照组的最终存活率 M.个人的 JJB1403, M.个人的 JJC1404, and T. maritimum Kor-JJ分别为20%、15%和20%。相比之下,接种疫苗组的存活率显著提高,80%、75%和95%为艾滋病患者。 M.个人的 JJB1403, M.个人的 JJC1404, and T. maritimum Kor-JJ,分别。仅注射佐剂组在三种不同菌株( Fig. 5 )。经计算的接种组RPS分别为75%、80%和93%。 M.个人的 JJB1403, M.个人的 JJC1404, and T. maritimum Kor-JJ,分别( Fig. 5 ).
fas-26-10-605-g5Fig. 5. 注射全疫苗鱼类的存活模式(灭活两种 迈阿密人 其中一个 海蒂米丝肌 含有角化烯佐剂的抗原),仅含有无抗原佐剂的佐剂和实验感染(a)后的PBS M.个人的 JJB1403 5E+5 cells/fish, (B) M.个人的 JJC1404 5E+5 cells/fish and, (C) T. maritimum 8E+7 CFU/fish. 接种后四周进行了试验。PBS,磷酸盐缓冲盐水。下载原图
注射疫苗后血清抗体滴度
免疫组与对照组相比,对所有三种病原体的抗体水平一直较高( Fig. 6 )。在接种组中,抗体滴度 M.个人的 JJB1403, M.个人的 JJC1404, and T. maritimum Kor-JJ持续上升,直至接种后4周,随后在接种后6周开始下降。另一方面,对照组的抗体滴度维持在较低水平,在整个实验中没有显著差异。
fas-26-10-605-g6Fig. 6. 抗(a)疫苗接种后血清抗体水平的变化 迈阿密的 个人的 JJB1403, (B) 迈阿密人 JJC1404和(c) 海蒂米丝肌 . OD,光密度。下载原图
疫苗在野外试验中的功效
在四个农场( 表1 )。在农场,接种组有499条死鱼,而对照组有2256条。对照组从4Wpv开始,死亡率大幅上升,而接种疫苗组则显示显著死亡延迟开始,周死亡率和累计死亡率显著降低( 无花果。7a )。在农场B,接种组有2468条死鱼,而对照组有6920条死鱼。两组都因 M.个人的 和/或 T. maritimum 但在接种疫苗的组别中,疾病爆发的严重程度明显降低( 无花果。7b )。在农场C,接种组有317条死鱼,对照组有1301条死鱼被诊断为 M.个人的 和/或 T. maritimum 感染。对照组从接种后9周开始,死亡率突然上升,而接种组在整个试验期间每周的死亡率一直保持在低水平( Fig. 7C )。在D农场,接种组有1262条死鱼,对照组有4361条死鱼。这两个组在接种后4至6周之间有相当大的死亡率,但接种组的死亡率显著降低( Fig. 7D )。整体而言,研制的疫苗表明,由 M.个人的 和/或 T. maritimum 与对照组相比,四个农场的RPS值在52.98%至99.70%之间。
fas-26-10-605-g7Fig. 7. (a)A农场、(b)B农场、(c)C农场和(d)D农场接种疫苗和对照组每周和累计死亡率。下载原图
讨论
监测结果显示有两种血清型 M.个人的 在济州岛上 考克斯 1基因序列分析。… 考克斯 1基因因其易于分离、种类间差异大、种类间差异小和缺乏内子而被广泛认为是动物物种鉴定的有用标记物( 罗德里格斯等人,2017年 ). Moreover, 考克斯 1序列分析已应用于纤毛类的分类,以扩大该技术在门内的应用( 惠格等人。2013年 )。通过比较 考克斯 1个基因序列,21个 M.个人的 从橄榄比目鱼中分离出来的压力( P.奥立维叶斯 ),刺眼比目鱼( 黄冠花 ),以及斑点刀( 小花 )在韩国和日本被划分为五种血清型( 考克斯 1血清型1至5; 荣格等人。2011年 )。同样,另一项关于 M.个人的 通过血清学分析( 宋等人。,2009年b )。在2015年至2020年期间,我们共隔离了390人 M.个人的 从疾病中分离出来的橄榄比目鱼。其中血清型I(JJB1403)和血清型II(JJC1404)分别占总数的83%和17%。 M.个人的 分别表示新的血清型分布。 M.个人的 在韩国橄榄比目鱼养殖业。对气候变化的季节性变化缺乏研究。 M.个人的 血清型。因此,有必要进行具体调查,以便更全面地了解这些变化。
T. maritimum 是造成张力杆菌病的主要病因,在橄榄比目鱼( 金等人。,2007年 )。我们的研究观察到平均共感染率为58%。 M.个人的 和 T. maritimum 在济州岛的养鱼场,受球虫病影响的橄榄比目鱼。橄榄比目鱼感染 T. maritimum 一个人可以通过在皮肤上有深色外缘的环形(环形)表皮溃疡性病变,以及磨损的鳍和腐烂的尾巴( 马布鲁克等人,2023 )。但是,合并感染 M.个人的 和 T. maritimum 导致与皮肤和鳍部多处表皮和皮肤坏死性病变十分相似的临床征象,这些征象可深入到底层肌肉,并在晚期感染阶段引起严重炎症( 穆斯塔法等人。2010年 )。在橄榄比目鱼养殖业中,细菌病原体、病毒和寄生虫之间的合并感染很常见。然而,由于很难辨别临床症状,农民经常少报或忽视合并感染。 T. maritimum 在球虫病暴发期间,导致相关信息的缺乏。以前对其他鱼类的研究表明,细菌病原体的合并感染可能会产生免疫抑制作用,从而使寄生虫感染增加,并显著增加死亡率( 怀斯等人。,2021年 )。在我们的研究中,我们研制了一种由两种血清型 M.个人的 和 T. maritimum ,阐明其在预防黄毛精病,特别是在减少共同感染的细菌疾病负担和提高鱼类生存率方面的有效性。
为了提高疫苗的有效性,我们在本研究所研制的三价疫苗中使用了一种基于水质的乳剂(SE)佐剂。SE佐剂,如MF59、AS03和AF03,是含有完全可代谢的油液滴和表面活性剂的水中油乳剂。这些佐剂已得到广泛研究,并已证明是安全有效的,因为许多国家已批准人类疫苗的研制( 威尔森焊工等人。,2009年 )。SE佐剂作用的机制与促进抗原吸收和吸收免疫细胞有关,这将导致先天免疫系统和适应免疫系统更强大和更持续的激活( 竞争者等人。,2021年 )。通过加入SE佐剂,本研究中研制的三价疫苗具有很高的免疫原性,提供了强有力和持久的保护,以抵御球虫感染。 T. maritimum .值得注意的是,一些研究还评估了疫苗的有效性和在鱼类中使用油基佐剂的长期影响。例如,在大目鱼中,接种抗原和矿物油佐剂的疫苗,对其产生了重要的保护作用。 P.二选一 引起高血清抗体滴度( 桑马尔金等人。2008年 )。另一项研究 拉赫曼等人。(2000年) 证明了使用角烯佐剂比单独给予不活化黄霉素提供更好的保护。此外,在橄榄比目鱼中,最近的一项研究评估了病毒性出血性败血症病毒(VHSV)疫苗的有效性,并证实添加角烯佐剂可以提高疫苗的有效性和持久性( 维奈等人。2013年 ).
通过自然感染或疫苗免疫,鱼类可以产生特定的抗体,以抵抗各种鱼类中与预防球虫病直接相关的球虫( 广场等人。2014年 )。这些抗体能凝集纤毛细胞,通过激活传统的补体途径( 帕伦苏埃拉等人。,2009年 ; 广场等人。2014年 )。我们的研究在8周的实验期内观察到在接种疫苗的鱼体内高抗体的产生,这有助于在球虫的挑战中产生高RPS。以前的研究评价了不同鱼类种中不同球虫菌株接种后的抗体水平。例如,在大堡鱼中,鱼被杀了, P.二选一 疫苗在血清中产生的抗体水平明显高于未接种疫苗组,后者在接种疫苗后最多6个月内维持纤毛凝集活动( 伊格莱西亚斯等人。2003年 ; 桑马尔金等人。2008年 )。此外,多项研究已通过多项研究的实验挑战试验,证明特定抗体的产生水平与免疫鱼类中的鳞状毛虫病的存活率之间存在良好的相关性( 拉玛斯等人。2008年 )。据报告,使用佐剂,如矿物油和非矿物质蒙太尼胺系系系73-A,对于增加短球菌疫苗中的特异性抗体生产至关重要( 拉玛斯等人。2008年 ; 马布鲁克等人,2023 )。此外,在对海带石斑进行的一项研究中, U.海葵属 在接种后的2周和4周内,用多聚D、L-乳酸-甘油酸(PLGA)的抗原对特异性抗体的产生有促进作用( 哈里克里希南等人。2012年 ).
在先前的研究中,一些球虫疫苗试验仅在实验室条件下进行,显示出对各种纤毛染色的保护作用,包括 P.美国,美国。海葵属 ,以及 M.个人的 .在橄榄比目鱼中,开发了三种不同类型的疫苗(注射、浸入和口服)。 M.个人的 ,导致RPS值超过60%( 荣荣,2021年 ; 科勒等人。,2022年 ; 广场等人。2014年 ; 怀斯等人。,2021年 )。针对大目鱼,开发出了两种使用杀菌素疫苗的疫苗。 P.分叉 ( 马布鲁克等人,2023 ; 穆斯塔法等人。2010年 ),在一次试验中,单是抗原疫苗就显示出约30%的RPS。在另一个试验中,当含有蒙太尼的系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系系在海带石斑中,用包膜疫苗免疫 U.海葵属 结果产生令人印象深刻的80%RPS( 哈里克里希南等人。2012年 )。尽管在上述研究中观察到疫苗中的RPS值很高,但这些疫苗能否有效地保护鱼类免受多种血清型球虫感染或在实地经常发生的细菌合并感染。为了解决这个问题,我们针对两种血清型的 M.个人的 一种共同感染的细菌。我们在济州岛的四个橄榄比目鱼养殖场进行了田间试验,以评价其效果。在农场B和D,严重 M.个人的 和 T. maritimum在接种疫苗的人群中,感染和累计死亡率显著下降。虽然对照组的累计死亡率超过65%,但在两个农场,接种疫苗组的死亡率仅约为30%,表明RPS值超过50%。另一方面,A型和C型农场的累计死亡率相对较低,低于20%,在接种疫苗的群体中,保护水平甚至更高。这两个农场的RPS值都超过了70%,表明在中度球虫病爆发期间,通过接种疫苗,死亡率大幅度降低。据我们所知,这是第一次针对球虫病疫苗的现场试验。我们的结果突出表明,研制出的疫苗作为管理和控制的宝贵工具的潜力 M.个人的 和 T. maritimum 橄榄比目鱼农场感染。此外,必须通过继续监测和进一步研究,评估研制的疫苗的长期有效性,并调查长期内病原体菌株和合并感染模式的潜在变化。
结论
总之,我们的研究集中在 M.个人的 在济州岛的橄榄比目鱼养殖场,通过2015年至2020年的疾病强化监测确定。结果显示 M.个人的 血清型1占多数,占83%,而 M.个人的 血清型II占观察血清型的17%。此外,我们观察到有58%的合并感染率 T. maritimum 在鱼类中感染了球虫病。根据监测数据,我们针对两种血清型的 M.个人的 和 T. maritimum ,在实验室条件下(70%至93%不等)及实地试验(52.64%至76.38%不等),显示高RPS值的显著疗效。这种疫苗可能是有效管理和控制 M.个人的 和 T. maritimum 感染,有助于橄榄比目鱼养殖的整体健康和可持续性